第 9-1 章。核酸（DNA、RNA）提取纯化实验
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1. 人类DNA提取实验
2. 【动物细胞DNA提取实验】(#2-animal-cell-dna-extraction-experiment)
3. 【植物细胞DNA提取实验】(#3-plant-cell-dna-extraction-experiment)
5. RNA提取实验
1.人类 DNA 提取实验
⑴ 准备DNA提取样品。
① 通常使用口腔内部的血液、毛发或皮肤细胞。
⑵ 破坏细胞膜和核膜，使DNA从细胞核中释放出来。
⑶ 使用酶来防止DNA降解。
⑷ 制备15μl蛋白酶，置于微量管中，加入500μl样品。
⑸ 56°C 孵育使蛋白质降解，然后加入 500 μl 蛋白去除液（P.C.I）并混匀。
⑹ 13,000 rpm 离心 3 分钟，仅将上清液转移至新管中。
⑺ 向管中加入1ml 100%乙醇，置于冰上沉淀DNA。
⑻ 13,000 rpm 离心 5 分钟，小心弃去上清液。
⑼ 添加蒸馏水溶解DNA，并将DNA溶液转移至琼脂糖凝胶上。
⑽ 将DNA混合物装入琼脂糖凝胶中，从负极（阴极）向正极（阳极）施加电场。
⑾一定时间后，检查电泳结果，根据分子量分离，使用紫外检测或荧光检测。
2.动物细胞DNA提取实验
⑴用PBS溶液洗涤细胞。
① 去除动物细胞培养基或其他缓冲溶液的过程。
⑵ 将细胞悬浮于STE溶液中。
① 未来实验过程中使用的缓冲溶液。
⑶加入20%SDS溶液。
① 溶解细胞膜。
⑷ 加入蛋白酶K，孵育4小时。
① 分解细胞内蛋白质。
⑸ 离心机。
① 上清液用于下一步。
⑹ 加入苯酚并混合。
① 溶解细胞内蛋白质的过程。
⑺ 离心。
① 离心后可见三层：底部为苯酚层，中间为蛋白质层，顶部为上清液。
② DNA 存在于上清液中。
⑻ 加入冷的95%乙醇和乙酸钠，然后混合。
① 这为DNA沉淀创造了条件。
② 将这些物质添加到含有 DNA 的溶液中会使 DNA 凝结成线状。
⑼ 离心机。
① DNA 沉淀。
⑽ 加入70%乙醇与沉淀混合。
① 洗涤 DNA 的步骤。
⑾ 离心机。
⑿ 将沉淀物溶解在适当体积的缓冲溶液中。
3.植物细胞DNA提取实验
4.从细菌实验中分离质粒 DNA
⑴收获细菌。
⑵ 悬浮于含有 50 mM 葡萄糖、10 mM EDTA 和 25 mM Tris-HCl (pH 8.0) 的溶液中。
⑶ 加入0.2N NaOH和1.0%SDS溶液，混匀。
⑷加入3M醋酸钾溶液(pH 4.8)，然后混匀。
⑸ 离心机。
⑹ 加入异丙醇，然后混合。
⑺ 离心。
⑻ 用70%乙醇洗涤沉淀。
⑼ 将沉淀溶解在适量的缓冲液中。
5. RNA提取实验
⑴ 背景知识
① 与 DNA 相比，RNA 更容易被水解。
② 体内有一种叫做RNA酶的酶，可以破坏RNA。
⑵ 第一第一。保护 RNA 免遭 RNA 降解。> ① 使用RNase（核糖核酸酶）抑制剂DEPC（焦碳酸二乙酯）。
② DEPC还用作蛋白质的化学修饰试剂，乙氧基甲酰化蛋白质中的氨基和咪唑基团。
⑶ 第二第二。去除蛋白质。
① 方法 1. 用苯酚/氯仿处理：使蛋白质和 RNA 酶变性。
② 方法2. 使用超速离心等。
⑷ 第三rd。选择性分离RNA。
① 方法1. 【盐析】(https://jb243.github.io/pages/1339)
② 方法2. 多轮离心或超速离心。
输入：2019.03.06 20:13
编辑：2020.02.08 12:54